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    巴泰病毒单克隆抗体的制备及鉴定 认领
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    作者 朱翔宇 史宁 +2 位作者 李丽霞 蔡熙姮 刘昊 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期55-62,共8页
    巴泰病毒(Batai virus,BATV)是一种人兽共患病毒,近年在全球广泛流行。我国也有人和动物感染的相关报道,而目前对BATV的研究仅局限于分子检测和全基因测序,还没有关于BATV单克隆抗体的相关研究,但制备特异性强、活性好的单克隆抗体也是... 巴泰病毒(Batai virus,BATV)是一种人兽共患病毒,近年在全球广泛流行。我国也有人和动物感染的相关报道,而目前对BATV的研究仅局限于分子检测和全基因测序,还没有关于BATV单克隆抗体的相关研究,但制备特异性强、活性好的单克隆抗体也是防控BATV的关键。为了制备BATV单克隆抗体,本研究利用纯化的BATV作为抗原免疫雌性BALB/c小鼠,制备鼠源单克隆抗体。通过免疫小鼠后断尾取血,间接ELISA测其血清效价后,将SP2/0细胞与小鼠的脾细胞融合。ELISA方法筛选阳性细胞株,并进行亚克隆后制备单抗腹水,并利用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化腹水。结果获得7株单克隆抗体,包括5株IgG型和2株IgM型。其中制备的3E2单克隆抗体效价最高为1∶32 000。经间接ELISA、间接免疫荧光和Western Blot检测表明,制备的3E2单抗具有较好的纯度、活性和特异性,为BATV快速检测方法的建立及致病机制研究奠定了基础。 展开更多
    关键词 巴泰病毒(BATV) 单克隆抗体(mAb) 杂交瘤细胞(Hybridoma cell)
    1-芘丁酸单克隆抗体的制备及免疫学性能鉴定 认领
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    作者 胡骁飞 孔蒙蒙 +3 位作者 邢广旭 邢云瑞 孙亚宁 张改平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1114-1118,共5页
    目的:拟制备灵敏、特异的1-芘丁酸(PBA)单克隆抗体并对其免疫学性能进行鉴定。方法:碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原PBA-BSA和PBA-OVA。PBA-BSA免疫BALB/c小鼠,选择血清效价高、灵敏度良好的小鼠进行细胞融合并筛选出分泌抗PBA单克隆抗体... 目的:拟制备灵敏、特异的1-芘丁酸(PBA)单克隆抗体并对其免疫学性能进行鉴定。方法:碳二亚胺法(EDC)制备人工抗原PBA-BSA和PBA-OVA。PBA-BSA免疫BALB/c小鼠,选择血清效价高、灵敏度良好的小鼠进行细胞融合并筛选出分泌抗PBA单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法批量制备抗体并对其免疫学性能进行鉴定。结果:筛选出能稳定分泌PBA单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株10C2A6,单克隆抗体效价为1∶2.56×10^5,IC50为0.86 ng/ml,亚型为IgG2b型,亲和常数为1.96×10^9 L/mol,与芘、1-芘甲醛和1-芘甲醇的交叉反应率分别为1.74%、1.42%和0.63%,与其他物质交叉反应率均小于0.05%。结论:本实验成功制备出了灵敏、特异的PBA单克隆抗体,并为其免疫学检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
    关键词 1-芘丁酸 人工抗原 细胞融合 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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    猪流行性腹泻病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 认领 被引量:2
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    作者 张庆桥 王一鹏 +4 位作者 魏艳秋 米建华 赵雪 孙立旦 宋勤叶 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第1期31-35,I0002共6页
    为了制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)的单克隆抗体,本实验以重组PEDV-N蛋白免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术,经过3~5次亚克隆与筛选,获得了4株分泌抗PEDV McAb的杂交瘤细胞,分别命名为4A7、6C1、5E10和6F7。4株杂交瘤细胞分泌的McAb均为IgM... 为了制备猪流行性腹泻病毒(PEDV)的单克隆抗体,本实验以重组PEDV-N蛋白免疫BALB/c小鼠,利用细胞融合技术,经过3~5次亚克隆与筛选,获得了4株分泌抗PEDV McAb的杂交瘤细胞,分别命名为4A7、6C1、5E10和6F7。4株杂交瘤细胞分泌的McAb均为IgM,其轻链均为κ链。ELISA、Western Blot和免疫荧光鉴定结果表明,4株单抗均与N蛋白及PEDV具有良好的结合活性。复苏冻存的4株杂交瘤细胞,连续传代培养30代,4株杂交瘤细胞能够持续稳定分泌抗体,细胞上清的ELISA抗体效价均在1∶800以上。4株细胞诱生的小鼠腹水抗体效价为1∶10~5~1∶10~6。将单克隆抗体(4A7)用于免疫组化试验和IPMA时,其能够特异地识别PEDV人工感染猪小肠组织和Vero细胞内的病毒。上述实验结果表明,制备的单克隆抗体可以用于PEDV抗原检测以及体内病毒的组织定位分析,并可为进一步研发PEDV抗原或抗体检测技术奠定基础。 展开更多
    关键词 猪流行性腹泻病毒 N蛋白 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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    抗肺炎多糖和乙肝表面蛋白的单克隆抗体制备 认领
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    作者 钱雯 张莹 +6 位作者 陈南萍 陈玉秋 王丽丽 吴凯 陈敏 施競 李琦涵 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期926-932,共7页
    目的以肺炎多糖与乙肝表面蛋白的偶联物为抗原,同时制备分别抗多糖和乙肝表面蛋白的单抗隆抗体。方法通过将33F型肺炎多糖与乙肝表面蛋白的偶联物作为抗原对小鼠进行不同免疫剂量、不同免疫程序和不同免疫部位的免疫。选取免疫后抗体水... 目的以肺炎多糖与乙肝表面蛋白的偶联物为抗原,同时制备分别抗多糖和乙肝表面蛋白的单抗隆抗体。方法通过将33F型肺炎多糖与乙肝表面蛋白的偶联物作为抗原对小鼠进行不同免疫剂量、不同免疫程序和不同免疫部位的免疫。选取免疫后抗体水平较高的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,再通过肺炎多糖和乙肝表面蛋白抗原进行特异性筛选,以获得杂交瘤细胞,从而制备相应的单克隆抗体。结果偶联物免疫小鼠后,诱导小鼠产生了针对33F型肺炎多糖的血清抗体和乙肝表面蛋白的血清抗体。分别获得了能持续表达抗33F型肺炎多糖或乙肝表面蛋白抗体的单克隆细胞株各一株。经验证,用这两株单克隆细胞制备对应的腹水型单抗对3个不同批次制备的33F型肺炎多糖和乙肝病毒表面蛋白样本的回收率为95%~105%。结论以33F型肺炎多糖与乙肝表面蛋白的偶联物为抗原免疫小鼠后可以同时制备分别针对33F型肺炎多糖或乙肝表面蛋白的单克隆抗体,可用于33F型肺炎多糖或乙肝表面蛋白的定量检测。 展开更多
    关键词 偶联物 单克隆抗体 肺炎多糖 杂交瘤细胞 乙肝病毒表面蛋白
    肺炎链球菌免疫小鼠程序的优化及杂交瘤细胞株的建立 认领
    5
    作者 吴元元 沈荣 +4 位作者 李雄雄 应莲芳 周晖国 徐世友 张生琰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第8期915-918,922共5页
    目的优化肺炎链球菌CSR SCS2 clone1小鼠的免疫程序,同时建立肺炎链球菌C多糖(C polysaccharides,CPs)杂交瘤细胞株。方法制备免疫抗原CSR SCS2 clonel,进行小鼠免疫程序优化:抗原量[(0. 5~2)×10~8个、(1~4)×108个、(2. 4~10)... 目的优化肺炎链球菌CSR SCS2 clone1小鼠的免疫程序,同时建立肺炎链球菌C多糖(C polysaccharides,CPs)杂交瘤细胞株。方法制备免疫抗原CSR SCS2 clonel,进行小鼠免疫程序优化:抗原量[(0. 5~2)×10~8个、(1~4)×108个、(2. 4~10)×10~8个)]、免疫间隔时间(3 d、1周、2周)、免疫途径(腹腔、腹股沟及尾静脉),同时确定抗原是否添加佐剂,间接ELISA法检测小鼠血清抗体水平。采用优化程序免疫小鼠,取血清效价最高的小鼠脾细胞,经传统单克隆抗体制备技术建立肺炎链球菌C-Ps杂交瘤细胞株,并检测细胞株的染色体数目及其分泌抗体的稳定性及特异性。结果确定小鼠最适免疫程序为:抗原量为(1~4)×108个,且需添加弗氏佐剂,免疫间隔时间为1周,免疫途径为腹股沟注射。最适程序免疫小鼠血清抗体效价达1∶12 000以上。建立了3株肺炎链球菌C-Ps杂交瘤细胞,命名为A4、G8、H10株,染色体数目分别为98、102和102,分泌的抗体具有良好的稳定性和特异性。结论成功优化了肺炎链球菌小鼠的免疫程序,并建立了肺炎链球菌C-Ps杂交瘤细胞株,为肺炎链球菌荚膜多糖中C-Ps含量检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
    关键词 肺炎链球菌 C多糖 免疫程序 杂交瘤细胞
    猪流感病毒H1N1亚型HA蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 认领
    6
    作者 朱和超 范桂芳 +3 位作者 朱莉莉 彭忠 华琳 吴斌 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第6期81-85,共5页
    为获得H1N1亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的单克隆抗体(McAb),选取A/swine/NanChang/H1N1/2009毒株,病毒经增殖、超速离心后,收集病毒粒子作为免疫原,将SIV粒子包被建立了间接ELISA方法。将免疫4次的BALB/c小鼠,经间接ELISA测定小... 为获得H1N1亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的单克隆抗体(McAb),选取A/swine/NanChang/H1N1/2009毒株,病毒经增殖、超速离心后,收集病毒粒子作为免疫原,将SIV粒子包被建立了间接ELISA方法。将免疫4次的BALB/c小鼠,经间接ELISA测定小鼠血清效价,将效价高的小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(sp2/0)进行融合。采用间接ELISA的方法筛选效价高的阳性细胞孔,采用有限稀释法进行3轮亚克隆,得到了5株杂交瘤细胞株,分别命名为2C6、5G5、1D5、3G3、4F11。随后对5株杂交瘤细胞的亚型进行鉴定,显示2C6、1D5、4F11为IgM亚型,5G5、3G3为IgG1亚型,5株杂交瘤的L链均为k链。间接免疫荧光(IFA)和Western blot检测表明,5G5能够与HA蛋白发生特异性的结合。本研究为进一步建立H1亚型SIV的相关检测方法及对HA蛋白的功能研究奠定基础。 展开更多
    关键词 猪流感病毒 流感病毒血凝素蛋白 杂交瘤细胞 单克隆抗体
    伪狂犬病毒被膜蛋白VP22单克隆抗体的制备及免疫电镜方法的建立 认领
    7
    作者 刘慧敏 陈利红 +3 位作者 史智宾 刘春国 仇铮 王靖飞 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第11期37-40,252共5页
    为了制备伪狂犬病毒(PRV)被膜蛋白VP22的单克隆抗体并建立免疫电镜方法,试验首先构建真核重组质粒pCAGGS-UL49,酶切及间接免疫荧光验证该质粒是否构建成功,然后用真核重组质粒以100μg/只的剂量免疫6周龄Balb/c雌性小鼠,经过4次免疫... 为了制备伪狂犬病毒(PRV)被膜蛋白VP22的单克隆抗体并建立免疫电镜方法,试验首先构建真核重组质粒pCAGGS-UL49,酶切及间接免疫荧光验证该质粒是否构建成功,然后用真核重组质粒以100μg/只的剂量免疫6周龄Balb/c雌性小鼠,经过4次免疫后进行细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性克隆,抗体亚类试剂盒鉴别抗体亚类,收集第5,10,20代次的杂交瘤细胞上清液用ELISA法检测其效价,Western-blot法鉴定其特异性,将该抗体分别稀释50,100,200倍并作为一抗,免疫电镜检测VP22蛋白的表达效果。结果表明:获得1株稳定分泌VP22蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞(3D6),该单克隆抗体的亚类为IgM,能与VP22蛋白发生特异性反应,100倍稀释的单克隆抗体可达到利用免疫电镜技术检测细胞内该蛋白表达的最佳效果。说明筛选得到的PRV被膜蛋白VP22单克隆抗体和建立的免疫电镜方法可用于该病毒的致病性及装配机制研究。 展开更多
    关键词 伪狂犬病毒 被膜蛋白 单克隆抗体 细胞融合 杂交瘤细胞 免疫电镜
    中华蜜蜂囊状幼虫病病毒单克隆抗体的制备与鉴定 认领
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    作者 张鹤 李明 +4 位作者 孙莉 费东亮 岳金金 金宏凯 马鸣潇 《病毒学报》 CSCD 北大核心 2017年第6期914-919,共6页
    为了制备中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)单克隆抗体,本实验利用纯化的中华蜜蜂囊状幼虫病毒(CSBV)免疫Balb/c小鼠,经过3次免疫后,小鼠断尾采血测其血清效价,选择效价高于1∶80 000的小鼠,在细胞融合前3~4d再加强免疫一次。取免疫小... 为了制备中华蜜蜂囊状幼虫病病毒(CSBV)单克隆抗体,本实验利用纯化的中华蜜蜂囊状幼虫病毒(CSBV)免疫Balb/c小鼠,经过3次免疫后,小鼠断尾采血测其血清效价,选择效价高于1∶80 000的小鼠,在细胞融合前3~4d再加强免疫一次。取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,用间接ELISA筛选阳性细胞株并进行3次亚克隆后注射入Balb/c小鼠(Mus musculus)腹腔制备单抗腹水。共获得9株稳定分泌抗CSBV的单克隆抗体,命名为10A1、5B10、5A5、5H2、11D7、9A5、1D3、3C10、10C4,效价都在1∶16 000以上,经间接ELISA实验检测表明,具有较好的特异性。在此基础上,将9株腹水单抗分别与CSBV互作后,接种于2~3日龄中华蜜蜂幼虫,观察幼虫死亡率,研究单克隆抗体中和CSBV病毒能力,结果表明筛选到三株单克隆抗体(10A1、5A5、9A5)对CSBV有中和作用,为CSBV的防治研究奠定了基础。 展开更多
    关键词 中华蜜蜂囊状幼虫病毒(CSBV) 杂交瘤细胞 单克隆抗体(McAb)
    IL-17单克隆抗体的制备与鉴定 认领 被引量:2
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    作者 桑锋锋 高洋 +3 位作者 张洪杰 朱伟英 王毅 陈德坤 《动物医学进展》 北大核心 2017年第11期52-55,共4页
    为制备山羊IL-17单克隆抗体,诱导重组菌rIL-17-pET32a-TransB(DE3)表达山羊IL-17重组蛋白(rIL-17),纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫合格的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆细胞株。对获得的杂... 为制备山羊IL-17单克隆抗体,诱导重组菌rIL-17-pET32a-TransB(DE3)表达山羊IL-17重组蛋白(rIL-17),纯化后免疫BALB/c小鼠,取免疫合格的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆细胞株。对获得的杂交瘤细胞进行染色体组型分析,并对其分泌的IL-17单克隆抗体进行抗体特异性、抗体类别等分析。结果显示,成功获得了纯化的山羊IL-17原核表达产物;筛选到1株能特异性分泌山羊IL-17单克隆抗体的杂交瘤细胞株-B6,其分泌的单克隆抗体亚型为IgG1,抗体轻链为κ。 展开更多
    关键词 山羊 IL-17单克隆抗体 杂交瘤细胞 酶联免疫吸附试验
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    抗主要组织相容性相关蛋白MICA/B的单克隆抗体制备及应用 认领 被引量:3
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    作者 田芳 罗伟光 +4 位作者 郭旭丽 郭靖 罗奇志 王慧鹏 邹义洲 《中国免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第10期1514-1519,共6页
    目的:制备抗主要组织相容性相关蛋白A/B(MICA/B)的单克隆抗体并对其特异性进行验证。方法:以重组MICA*012蛋白免疫小鼠后将其脾细胞与SP2/0细胞进行融合和筛选得杂交瘤细胞株,并用ELISA对其中9B10细胞株产生的单克隆抗体进行效价... 目的:制备抗主要组织相容性相关蛋白A/B(MICA/B)的单克隆抗体并对其特异性进行验证。方法:以重组MICA*012蛋白免疫小鼠后将其脾细胞与SP2/0细胞进行融合和筛选得杂交瘤细胞株,并用ELISA对其中9B10细胞株产生的单克隆抗体进行效价检测以及通过Western blot、Luminex、免疫荧光对其特异性进行检测。结果:获得6株杂交瘤细胞株,其中9B10细胞株产生单克隆抗体(m Ab)9B10的最低反应浓度为0.02 ng/μl,且m Ab 9B10可应用于Western blot、Luminex和免疫组化荧光试验对MICA和MICB分子的检测。结论:成功获得可同时检测MICA和MICB表达的单克隆抗体9B10。 展开更多
    关键词 MICA MICB 单克隆抗体 杂交瘤细胞
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    抗细粒棘球绦虫EdiagA864单克隆抗体的制备及鉴定 认领
    11
    作者 刘原源 高珺珊 +5 位作者 宫鹏涛 张壮志 李建华 杨举 李赫 张西臣 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第6期606-609,共4页
    目的制备抗细粒棘球绦虫Ediag A864单克隆抗体,并进行鉴定。方法以细粒棘球绦虫Ediag A864蛋白为抗原,经皮下多点免疫BALB/c小鼠,共免疫4次。末次免疫3 d后制备小鼠脾细胞,在聚乙二醇(PEG)的作用下与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合... 目的制备抗细粒棘球绦虫Ediag A864单克隆抗体,并进行鉴定。方法以细粒棘球绦虫Ediag A864蛋白为抗原,经皮下多点免疫BALB/c小鼠,共免疫4次。末次免疫3 d后制备小鼠脾细胞,在聚乙二醇(PEG)的作用下与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,间接ELISA法筛选出阳性杂交瘤细胞株进行克隆,检测其染色体数及分泌的单克隆抗体亚型。采用体内培养法大量制备抗细粒棘球绦虫Ediag A864单克隆抗体,并经正辛酸-饱和硫酸铵法和Hi Trap Protein G HP亲和层析结合法纯化。结果经筛选克隆共获得4株可产生细粒棘球绦虫Ediag A864单克隆抗体的杂交瘤细胞株:2D12、3H4、4A6和6E5,细胞染色体数分别为97、101、98和96,重链亚型均为Ig G1,轻链亚型均为Kappa。2D12、3H4腹水效价为2×10^5,4A6和6E5腹水效价为1×10^5。纯化后的2D12抗体可见相对分子质量为46 000和26 000的重链和轻链条带。结论本实验获得的2D12是一株稳定的杂交瘤细胞株,且可产生高效价细粒棘球绦虫Ediag A864单克隆抗体,为细粒棘球绦虫病的免疫诊断奠定了基础。 展开更多
    关键词 细粒棘球绦虫 EdiagA864蛋白 单克隆抗体 杂交瘤细胞
    聚乙二醇安替安吉肽单抗制备及血药浓度检测方法的建立 认领 被引量:1
    12
    作者 陈巨冰 何俊劲 +1 位作者 吴蕊伶 徐寒梅 《药物生物技术》 CAS 2015年第4期324-327,共4页
    聚乙二醇安替安吉肽是抗肿瘤多肽安替安吉肽的聚乙二醇修饰产物,为了检测血液中聚乙二醇安替安吉肽含量,利用有限稀释法对分泌安替安吉肽的杂交瘤细胞克隆化并进行筛选,将筛选得到的细胞株制备的单克隆抗体用于建立间接竞争ELISA检测血... 聚乙二醇安替安吉肽是抗肿瘤多肽安替安吉肽的聚乙二醇修饰产物,为了检测血液中聚乙二醇安替安吉肽含量,利用有限稀释法对分泌安替安吉肽的杂交瘤细胞克隆化并进行筛选,将筛选得到的细胞株制备的单克隆抗体用于建立间接竞争ELISA检测血浆中聚乙二醇安替安吉肽含量。经克隆化筛选出的杂交瘤细胞生长迅速,细胞形态圆润,小鼠腹腔注射细胞数量为5×105时,d 9能收集腹水,收集腹水体积(7.06±0.56)m L,腹水效价1∶5.0×105。利用方阵法确定理想的包被抗原浓度为1∶4 000,一抗工作浓度为1∶32 000,该方法可检测线性范围为(25~3 200)ng/m L,回归方程为y=0.273x-0.277(R2=0.998 7),并且具有较好的回收率、准确度、精确度,回收率为(96.75~97.23)%,准确度为(94.9~95.89)%;日内相对标准偏差、日间相对标准偏差分别为(1.23~2.7)%和(2.94~5.82)%。利用ELISA方法测得聚乙二醇安替安吉肽大鼠体内消除半衰期为(23.585±2.214)h,达峰时间(24±0.629)h。由此表明,利用制备的单克隆抗体建立的间接竞争ELISA方法能够特异、可靠的检测聚乙二醇安替安吉肽血药浓度。 展开更多
    关键词 聚乙二醇安替安吉肽 杂交瘤细胞 单克隆抗体 间接竞争 酶联免疫反应 药代动力学
    霍乱毒素A亚单位基因的原核表达及单克隆抗体的制备 认领
    13
    作者 陈健 韦雨杏 +3 位作者 解晓燕 朱召芹 万延民 徐建青 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第6期780-783,788共5页
    目的 原核表达并纯化霍乱毒素A亚单位(cholera toxin subunitA,CTA)基因,建立分泌CTA单克隆抗体的杂交瘤细胞系,并制备单克隆抗体。方法 构建原核表达质粒pET30a-CTA,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG诱导表达6 h,表达产物经... 目的 原核表达并纯化霍乱毒素A亚单位(cholera toxin subunitA,CTA)基因,建立分泌CTA单克隆抗体的杂交瘤细胞系,并制备单克隆抗体。方法 构建原核表达质粒pET30a-CTA,转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG诱导表达6 h,表达产物经12%SDS-PAGE分析后,用Ni2+亲和层析柱纯化;将纯化的重组CTA蛋白免疫C57BL/6小鼠,运用杂交瘤细胞技术制备抗CTA的单抗,采用Western blot法及体外阻断实验检测抗CTA单抗的特异性及对CT毒性作用的体外阻断。结果 原核表达质粒pET30a-CTA经PCR及双酶切鉴定,证明构建正确;表达的重组CTA蛋白在相对分子质量25 000~35 000之间可见明显的目的蛋白条带,纯化后的重组CTA蛋白纯度达90%以上;获得1株可分泌抗CTA单抗的杂交瘤细胞株G6C3-D10,可与CTA蛋白特异性结合,在相对分子质量25 000~35 000之间可见明显的特异条带;杂交瘤培养上清中CTA特异性抗体滴度为54,与CT混合后,可明显抑制CT所诱导的细胞内环腺苷酸(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)水平的升高(P〉0.01)。结论 原核表达并纯化了CTA基因,获得了能够分泌具有阻断CT毒性作用的单抗的细胞株,为CTA毒性作用和佐剂机制的进一步研究提供了参考。 展开更多
    关键词 霍乱毒素 原核细胞 基因表达 杂交瘤细胞 单克隆抗体
    抗柱状黄杆菌单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其免疫学特性鉴定 认领 被引量:2
    14
    作者 吕娜 张懋岚 +4 位作者 张虹茜 殷晓平 赵国坤 孙强 张捷 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期744-748,共5页
    为制备针对柱状黄杆菌的单克隆抗体(McAb),利用颗粒性抗原免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合。经过有限稀释法筛选,得到2株稳定分泌抗柱状黄杆菌McAb的杂交瘤细胞株(2B5和4G7)。其分泌抗体亚类属于IgG1,轻链属于... 为制备针对柱状黄杆菌的单克隆抗体(McAb),利用颗粒性抗原免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合。经过有限稀释法筛选,得到2株稳定分泌抗柱状黄杆菌McAb的杂交瘤细胞株(2B5和4G7)。其分泌抗体亚类属于IgG1,轻链属于κ链。制备的McAb与迟钝爱德华氏菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌等水产病原菌均无交叉反应。表明首次成功建立了抗柱状黄杆菌McAb的制备方法,为柱状黄杆菌的快速检测奠定了基础。 展开更多
    关键词 柱状黄杆菌 单克隆抗体 杂交瘤细胞 免疫学特性
    金黄色葡萄球菌蛋白A单克隆抗体的制备 认领 被引量:1
    15
    作者 彭洪江 杜惠芬 +4 位作者 李克生 马卫静 杜丽娟 袁明 连晓雯 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1-5,12共6页
    为获得稳定性好、特异性强、效价较高的抗金黄色葡萄球菌蛋白A单克隆抗体,用热灭活的金黄色葡萄球菌wol-04菌体抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,以金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)为筛选抗原进行克隆筛选... 为获得稳定性好、特异性强、效价较高的抗金黄色葡萄球菌蛋白A单克隆抗体,用热灭活的金黄色葡萄球菌wol-04菌体抗原免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,以金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)为筛选抗原进行克隆筛选,并对各株单抗的生物学特性进行分析和鉴定.结果表明:试验获得了3株稳定分泌SPA单克隆抗体的杂交瘤细胞,其中单克隆抗体3B11、4F7为SPA表面抗原表位的单克隆抗体,与金黄色葡萄球菌wol-04菌体和SPA有较强的免疫反应性,免疫球蛋白亚类分别为IgG1和IgG3,具有稳定性好、特异性强、效价较高的特点. 展开更多
    关键词 金黄色葡萄球菌蛋白A 单克隆抗体 杂交瘤细胞 间接ELISA
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    分泌抗重金属铜抗体的杂交瘤细胞克隆方法的建立 认领
    16
    作者 赵丽 王凤龙 +3 位作者 杨慧 李鹏 刘满杏 李霞 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第12期 13-16,共4页
    为了建立有效地克隆分泌抗铜抗体杂交瘤细胞的方法,试验用不同浓度的甲基纤维素半固体培养基法培养杂交瘤细胞。结果表明:培养杂交瘤细胞的甲基纤维素最佳浓度为1.6%;获得多株阳性细胞,其中阳性细胞株3B1-C5的染色体数在100个以上,腹... 为了建立有效地克隆分泌抗铜抗体杂交瘤细胞的方法,试验用不同浓度的甲基纤维素半固体培养基法培养杂交瘤细胞。结果表明:培养杂交瘤细胞的甲基纤维素最佳浓度为1.6%;获得多株阳性细胞,其中阳性细胞株3B1-C5的染色体数在100个以上,腹水抗体效价达到1∶102 400,其分泌的抗体属IgM亚类,轻链为Kappa型;经间接ELISA方法检测,连续培养单细胞系93 d,3B1-C5细胞株能较稳定分泌抗体。说明含1.6%甲基纤维素的半固体培养法适合克隆分泌抗铜抗体的杂交瘤细胞。 展开更多
    关键词 杂交瘤细胞 甲基纤维素 克隆 抗体 鉴定
    抗人B7-H1单克隆抗体的制备和鉴定 认领 被引量:1
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    作者 舒震 侯登勇 +5 位作者 李晶 侯健伟 徐玉金 陈琳 张伟 张英起 《生物技术通讯》 CAS 2010年第4期 531-534,共4页
    目的:采用杂交瘤技术制备抗人B7-H1单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法:经抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞以常规方法融合;用间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株;阳性克隆用有限稀释法获得稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交... 目的:采用杂交瘤技术制备抗人B7-H1单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法:经抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞以常规方法融合;用间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株;阳性克隆用有限稀释法获得稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;扩增杂交瘤细胞注射进小鼠腹腔后制备腹水;纯化腹水中的单克隆抗体并对其亚型进行鉴定;用间接ELISA法测抗体效价;将肺癌组织制成石蜡切片,用抗人B7-H1抗体进行免疫组化染色。结果:获得1株稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型为IgG1;抗体效价为1×108,纯化后的抗体含量为6.76g/L;免疫组化实验中,单抗可与肺癌组织表面的B7-H1蛋白特异地结合。结论:制备了人B7-H1单克隆抗体,为B7-H1检测试剂盒的研制奠定了基础。 展开更多
    关键词 人B7-H1 杂交瘤细胞 单克隆抗体
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    空肠弯曲菌PEB1重组蛋白的表达及单克隆抗体的制备 认领
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    作者 任思坡 孙万邦 +3 位作者 杜联峰 余妍 黄俊琼 罗军敏 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第43期 16-18,共3页
    目的表达CJPEB1重组蛋白,制备并鉴定CJ PEB1蛋白的单克隆抗体。方法诱导培养工程菌E.co-liBL21(DE3)表达CJPEB1重组蛋白,以PEB1蛋白溶液与等体积的佐剂完全乳化作为免疫原常规免疫BALB/C小鼠,制备单克隆抗体。无菌取其脾细胞与... 目的表达CJPEB1重组蛋白,制备并鉴定CJ PEB1蛋白的单克隆抗体。方法诱导培养工程菌E.co-liBL21(DE3)表达CJPEB1重组蛋白,以PEB1蛋白溶液与等体积的佐剂完全乳化作为免疫原常规免疫BALB/C小鼠,制备单克隆抗体。无菌取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,建立杂交瘤细胞株。将建株的杂交瘤细胞注入小鼠腹腔诱生腹水制备抗体,应用间接ELISA法和双向琼脂扩散试验检测腹水中抗体的效价,应用Western-blot和玻片凝集试验检测抗体的特异性。结果得到高纯度的CJPEB1重组蛋白,蛋白质分子量大小与预计的理论值相符。获得两株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。两株杂交瘤细胞诱生的腹水,经间接ELISA法检测,腹水中的抗体效价分别为8×10^4和5×10^4,经双向琼脂扩散试验检测效价均为1:16。通过Westem-blot鉴定,两株杂交瘤细胞分泌的抗体均与PEB1蛋白特异性地结合;其诱生的腹水与CJ菌液混合出现凝集现象,而与大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌等菌液混合均未出现凝集现象。结论成功建立了两株稳定分泌抗CJPEB1重组蛋白抗体的杂交瘤细胞株并制备了抗CJPEB1蛋白的单克隆抗体,为今后研究多种检测CJ的方法创造了条件。 展开更多
    关键词 空肠弯曲菌 PEB1重组蛋白 单克隆抗体 杂交瘤细胞
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    抗ICAM-1单克隆抗体的制备及其活性 认领 被引量:3
    19
    作者 孙红 万忠海 +3 位作者 张国利 吴广谋 朱平 岳玉环 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第4期 308-311,共4页
    目的制备具有生物活性的抗人细胞间黏附分子-1(ICAM-1)单克隆抗体。方法以人ICAM-1为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术并经HAT选择培养和克隆化,筛选出稳定分泌抗人ICAM-1 McAb的杂交瘤细胞株,并对McAb进行纯化。用ELISA间接法... 目的制备具有生物活性的抗人细胞间黏附分子-1(ICAM-1)单克隆抗体。方法以人ICAM-1为抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术并经HAT选择培养和克隆化,筛选出稳定分泌抗人ICAM-1 McAb的杂交瘤细胞株,并对McAb进行纯化。用ELISA间接法测定效价并鉴定其亚类,Westerm blot鉴定其抗原特异性,细胞黏附试验检测其中和活性。结果筛选出1株可稳定分泌抗人ICAM-1抗体的杂交瘤细胞株3F2,杂交瘤染色体众数为98~104。纯化后的单抗蛋白浓度为1.253mg/ml,纯度达83.6%,效价可达2.56×10^5。其分泌的抗体亚型为IgG1,腹水效价达5.12×10^5,可与ICAM-1特异性结合,可抑制ICAM-1与淋巴瘤细胞间的黏附,具有明显的中和ICAM-1的活性。结论已成功制备出抗ICAM-1的McAb,为其进一步的研究和应用奠定了基础。 展开更多
    关键词 细胞间黏附分子-1 单克隆抗体 杂交瘤细胞 活性
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    谷氨酰胺限制对杂交瘤细胞生长、代谢和单抗生产的影响 认领 被引量:7
    20
    作者 张淑香 李东晓 +2 位作者 朱明龙 谭文松 张嗣良 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第1期 77-82,共6页
    利用批培养和流加培养方式以及不同的流加培养成分,考察了谷氨酰胺限制对杂交瘤细胞生长、代谢和单抗生成的影响。谷氨酰胺限制降低了最大细胞密度和单抗比生产速率,说明谷氨酰胺限制阻碍了细胞生长和单抗生产。谷氨酰胺限制流加培养... 利用批培养和流加培养方式以及不同的流加培养成分,考察了谷氨酰胺限制对杂交瘤细胞生长、代谢和单抗生成的影响。谷氨酰胺限制降低了最大细胞密度和单抗比生产速率,说明谷氨酰胺限制阻碍了细胞生长和单抗生产。谷氨酰胺限制流加培养的YLac/GIns。和TLac/Gclls。高于批培养和谷氨酰胺非限制流加培养的,说明谷氨酰胺限制促进了葡萄糖向乳酸的生成,增强了葡萄糖的溢流代谢。与批培养和谷氮酰胺非限制流加培养相比,谷氨酰胺限制流加培养的氨和丙氨酸浓度及其比生成速率较低,而且YAnm/Gln高,TAla/Glu和YAla/Cclls低,说明谷氨酰胺限制使得较多的谷氨酰胺参与脱氢反应,提高了谷氨酰胺的利用率,降低了细胞对氨和丙氨酸的生成,从而削弱了氨对细胞生长和单抗生产的毒害。在流加培养中应严格控制谷氨酰胺的流加浓度及与葡萄糖的配比,要避免谷氨酰胺过分限制导致的葡萄糖溢流代谢和对细胞生长和单抗产率的不利效应。 展开更多
    关键词 谷氨酰胺限制 流加培养 杂交瘤细胞 葡萄糖
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