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    两种高危型HPV假病毒的构建及其在血清中和抗体测定中的应用 认领 被引量:2
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    作者 李雄雄 董占柱 +2 位作者 吴元元 安静 马超 《微生物学免疫学进展》 2019年第5期1-9,共9页
    目的 构建人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型(HPV16)和18型(HPV18)假病毒,探索优化假病毒制备的条件,并利用制备的假病毒评价HPV疫苗血清抗体的中和活性。方法 将优化后的HPV16和HPV18 L1、L2和EGFP基因片段分别插入pcDNA3.1... 目的 构建人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型(HPV16)和18型(HPV18)假病毒,探索优化假病毒制备的条件,并利用制备的假病毒评价HPV疫苗血清抗体的中和活性。方法 将优化后的HPV16和HPV18 L1、L2和EGFP基因片段分别插入pcDNA3.1+载体中,通过多质粒共转染293FT细胞制备假病毒。对转染试剂、多质粒共转染比例、转染时间和细胞裂解时间进行摸索优化,通过测定假病毒的滴度,确定假病毒制备的最佳条件。收获的假病毒用30%的碘克沙醇作为介质进行超速离心纯化,纯化后的假病毒用于电镜观察。利用假病毒中和试验对制备的原核表达复性蛋白HPV16 L1免疫血清以及HPV16和HPV18病毒样颗粒(virus-like particles, VLP)免疫血清进行中和活性评价。结果 成功构建了假病毒,并确定了假病毒制备的最佳条件:pL1∶pL2∶pEGFP等3种质粒共转染比例为1∶0.1∶0.5,总量为4μg;转染时间为72 h,细胞裂解时间为24 h时获得的假病毒滴度最高。透射电镜观察结果显示,HPV16和HPV18假病毒颗粒基本呈规则圆形,形态上与天然病毒颗粒相似。中和试验结果显示,当用原核表达复性蛋白HPV16 L1免疫血清中和HPV16假病毒时,并不能抑制假病毒的感染活性;但HPV16和18 VLP免疫血清能明显的抑制HPV16和HPV18假病毒的感染活性。结论 成功构建并制备了2种高危型HPV假病毒,并可用于中和试验评价HPV疫苗血清抗体的中和活性。 展开更多
    关键词 高危型人乳头瘤病毒 假病毒 中和试验 感染活性
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    伤寒沙门菌中试阶段发酵过程染菌建模预测 认领
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    作者 徐世友 于飞飞 +3 位作者 杨千苇 周晖国 吴元元 应莲芳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第6期653-656,共4页
    目的建立模型预测伤寒沙门菌中试阶段发酵过程染菌情况。方法通过对伤寒沙门菌中试阶段36批次发酵数据进行分析,选取特征和目标变量,利用GBDT(Gradient Boosting Decision Tree,GBDT)+LR(Logistic Regression,LR)混合机器学习算法建立... 目的建立模型预测伤寒沙门菌中试阶段发酵过程染菌情况。方法通过对伤寒沙门菌中试阶段36批次发酵数据进行分析,选取特征和目标变量,利用GBDT(Gradient Boosting Decision Tree,GBDT)+LR(Logistic Regression,LR)混合机器学习算法建立染菌预测模型,并对所建立模型进行预测评估。结果选取特征为:培养基A600值,0、2、3、4 h发酵液A600值,2、3、4 h每升发酵液的累计葡萄糖消耗量,共8个特征;以发酵4 h是否染菌作为目标变量;建立染菌预测模型。利用预测样本对所建立染菌预测模型进行预测评估,其auc值为0. 83。结论利用所建立的伤寒沙门菌中试阶段发酵过程染菌预测模型可对发酵过程进行染菌预测。 展开更多
    关键词 伤寒沙门菌 染菌 建模
    葡萄糖及其代谢产物对犬肾上皮-siat7e细胞生长代谢的影响 认领 被引量:1
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    作者 张生琰 孙燕 +4 位作者 周晖国 吴元元 徐世友 李薇 应莲芳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第6期644-647,652共5页
    目的探讨葡萄糖及其代谢产物对转染siat7e基因的犬肾上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞(MDCKsiat7e)生长代谢的影响。方法采用含不同起始量(3. 86、6. 46、9. 29、10. 60、12. 80、16. 06 g/L)和维持量(3、5、7 g/L)葡萄糖浓度... 目的探讨葡萄糖及其代谢产物对转染siat7e基因的犬肾上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞(MDCKsiat7e)生长代谢的影响。方法采用含不同起始量(3. 86、6. 46、9. 29、10. 60、12. 80、16. 06 g/L)和维持量(3、5、7 g/L)葡萄糖浓度的无血清无蛋白培养基cellhappy BD001(简称BD001),分别分批培养MDCK-siat7e细胞,每24 h取样进行活细胞计数及葡萄糖、乳酸、氨含量测定。结果不同起始及维持量葡萄糖浓度的BD001对MDCK-siat7e细胞生长均无明显影响,细胞比生长速率以及乳酸、氨比生成速率和乳酸、氨含量差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论葡萄糖并不是制约MDCK-siat7e细胞生长的重要因素,起始葡萄糖浓度较低时,细胞生长后期可能利用代谢副产物乳酸维持生长,而起始葡萄糖浓度较高时,代谢副产物乳酸则有可能抑制细胞的生长,氨对细胞的生长具有明显的抑制作用。 展开更多
    关键词 MDCK-siat7e细胞 葡萄糖 乳酸 生长代谢
    肺炎链球菌C多糖含量检测方法的建立 认领
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    作者 吴元元 李雄雄 +1 位作者 沈荣 应莲芳 《微生物学免疫学进展》 2019年第2期22-28,共7页
    目的使用肺炎链球菌C多糖单克隆抗体(单抗),建立检测荚膜多糖中残留的C多糖含量的方法。方法选择BALB/c雌性小鼠,采用体内诱生单抗腹水,放大生产肺炎链球菌C多糖单抗;使用间接ELISA、抑制性ELISA对其进行特异性鉴定;用特异性和亲和力高... 目的使用肺炎链球菌C多糖单克隆抗体(单抗),建立检测荚膜多糖中残留的C多糖含量的方法。方法选择BALB/c雌性小鼠,采用体内诱生单抗腹水,放大生产肺炎链球菌C多糖单抗;使用间接ELISA、抑制性ELISA对其进行特异性鉴定;用特异性和亲和力高的单抗尝试建立肺炎链球菌荚膜多糖中C多糖含量检测的速率比浊法,并对该方法的线性、精密度、特异性进行验证。结果所制4株单抗的抗体类别均为IgM,识别的抗原表位互不相同,亲和力也不同。间接ELISA、抑制性ELISA结果均显示,所获得的单抗能够作用于肺炎链球菌C多糖上的磷酸胆碱位点,具有很好的特异性。选择单抗E8建立速率比浊检测方法的线性、精密度和特异性均良好,检测结果表明肺炎链球菌23个血清型荚膜多糖中C多糖含量不同。结论利用单抗建立了检测肺炎链球菌荚膜多糖中残留的C多糖的含量的速率比浊法。 展开更多
    关键词 肺炎链球菌 C多糖 单克隆抗体
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    蛋白质类生物制品几种不合格冻干外观及解决方案 认领
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    作者 朱俐(综述) 李薇 刘鹏(审校) 《微生物学免疫学进展》 2019年第2期79-86,共8页
    冻干即真空冷冻干燥,是利用升华的原理使物料脱水的一种干燥技术,其广泛用于生物制品,特别是蛋白质类生物制品的生产,以保护生物制品生物活性成分。外观是冻干制品的重要质量属性之一,合格的冻干制品外观应是疏松多孔、色泽均匀、质地... 冻干即真空冷冻干燥,是利用升华的原理使物料脱水的一种干燥技术,其广泛用于生物制品,特别是蛋白质类生物制品的生产,以保护生物制品生物活性成分。外观是冻干制品的重要质量属性之一,合格的冻干制品外观应是疏松多孔、色泽均匀、质地细腻的固体。在大规模生产中,由于冻干参数复杂、设备操作的灵活性等因素,冻干制品的饼块有时会出现收缩、裂化、塌陷、雾化、回熔、喷瓶、结膜等不合格外观,从而造成极大的经济损失。现就近年来在蛋白质类生物制品冻干过程中易发生的几种不合格外观及解决方案作一概述。 展开更多
    关键词 生物制品 蛋白质 冷冻干燥 外观
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    基于Triton Ⅹ-114浊点萃取法在生物分子分离中的应用 认领 被引量:1
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    作者 徐世友 于飞飞 应莲芳(审校) 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2019年第2期220-227,共8页
    液-液萃取等传统方法无法满足不断提高的生物分子分离要求,浊点萃取(cloud point extraction,CPE)以其良好的分离效果被广泛应用。本文基于Triton Ⅹ-114 CPE法在生物分子分离中的应用进行了概述,主要涉及CPE原理、过程、应用及技术改进。
    关键词 浊点萃取 TRITON Ⅹ-114 分离
    脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NhhA研究进展 认领
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    作者 李正宇(综述) 应莲芳(审校) 《微生物学免疫学进展》 2018年第6期71-75,共5页
    脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm,以下简称脑膜炎球菌),是引起流行性脑脊髓膜炎疾病的主要病原体。NhhA(Neisseria hia homologue)是Nm的一种寡聚外膜蛋白。研究表明,NhhA在宿主-病原体相互作用中具有重要功能,如参与Nm无症状... 脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitides,Nm,以下简称脑膜炎球菌),是引起流行性脑脊髓膜炎疾病的主要病原体。NhhA(Neisseria hia homologue)是Nm的一种寡聚外膜蛋白。研究表明,NhhA在宿主-病原体相互作用中具有重要功能,如参与Nm无症状鼻咽黏膜定植,诱导巨噬细胞凋亡,具有免疫刺激功能等。该蛋白表面暴露,并在许多Nm菌株中都能表达,表明它有希望作为候选疫苗。现对NhhA的分子结构、在宿主-病原体相互作用中的功能以及作为疫苗候选物的研究现状等作一概述。 展开更多
    关键词 脑膜炎奈瑟菌 NhhA 功能 疫苗 候选抗原
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    分光光度法测定W135群脑膜炎奈瑟菌生物量 认领 被引量:2
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    作者 徐世友 周晖国 +3 位作者 于飞飞 许博 杨明明 应莲芳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第12期1326-1330,共5页
    目的建立快速准确测量W135群脑膜炎奈瑟菌(Neissria meningitidis)生物量的紫外分光光度法。方法取W135群脑膜炎奈瑟菌发酵液进行系列浓度稀释,利用紫外-可见光分光光度法在最适吸收波长处测定各稀释度发酵液的A值,同时测定各浓度下... 目的建立快速准确测量W135群脑膜炎奈瑟菌(Neissria meningitidis)生物量的紫外分光光度法。方法取W135群脑膜炎奈瑟菌发酵液进行系列浓度稀释,利用紫外-可见光分光光度法在最适吸收波长处测定各稀释度发酵液的A值,同时测定各浓度下细菌数、菌体干湿重,建立W135群脑膜炎奈瑟菌A值与菌体干湿重、细菌数间的关系曲线,利用所建立的回归方程计算细菌生物量。取4组不同浓度的W135群脑膜炎奈瑟菌培养液,采用建立的方法测量细菌生物量并与实际测量值对比,验证该方法的准确性。结果 W135群脑膜炎奈瑟菌A_(450)值与菌体干湿重、细菌数呈线性关系,R~2分别为0.990、0.980和0.926。利用所建立的回归方程得到的生物量结果与实际测量结果无统计学差异(P〉0.05)。结论利用所建立的A值与生物量的关系方程可快速简便地检测到W135群脑膜炎奈瑟菌生物量的变化。 展开更多
    关键词 W135群脑膜炎奈瑟菌 紫外分光光度法 生物量
    细菌培养基中营养物质的代谢及优化方法 认领 被引量:4
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    作者 杨明明 李国晏 应莲芳 《微生物学免疫学进展》 2016年第5期90-94,共5页
    细菌培养基是细菌体外生长的基质,其中营养物质是细菌生长、繁殖的基本成分。因此,探索培养基中营养物质的代谢,优化培养基配方,对细菌体外培养的研究及规模化生产有着重要的指导意义。现就细菌培养基分类、营养物质、细菌在营养物... 细菌培养基是细菌体外生长的基质,其中营养物质是细菌生长、繁殖的基本成分。因此,探索培养基中营养物质的代谢,优化培养基配方,对细菌体外培养的研究及规模化生产有着重要的指导意义。现就细菌培养基分类、营养物质、细菌在营养物质中的代谢及培养基优化方法等方面予以总结。 展开更多
    关键词 细菌 培养基 营养物质 代谢 优化
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